上期我們說了關于光阻法和顯微計數法不溶性微粒儀檢測的優缺點以及在什么情況下用顯微計數法不溶性微粒儀檢測在什么情況下用光阻法檢測，這期梓夢編輯部就專門說說關于光阻法的操作流程和操作標準.
不溶性微粒檢查法（《中國藥典》2010年版二部附錄IX C）系在可見異物檢查符合規定后，用以檢測靜脈用注射劑（溶液型注射液、注射液無菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無菌原料藥中不溶性微粒的大小及數量。
《中國藥典》規定了兩種檢查方法即光阻法和顯微計數法。當光阻法測定結果不符合規定或供試品不適于用光阻法測定時，應采用顯微計數法不溶性微粒儀進行測定，并以顯微計數法不溶性微粒儀的測定結果作為判定依據。
什么是光阻法？
光阻法是當一定體積的注射液通過一窄小的檢測區時,與液體流向垂直的入射光，由于被供試液中的微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號降低,這種信號變化與微粒的截面積大小相關，再根據通過檢測區供試液的體積，計算出1ml供試液中含10μm以上（≥10um）及含25μm以上（≥25um）的不溶性微粒數。
光阻法的實驗環境、儀器與用具
實驗環境 實驗操作環境應不得引入外來微粒，測定前的操作在層流凈化臺中進行。玻璃儀器和其他所需的用品均應潔凈，無微粒。本法所用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑），使用前須經不大于1.0μm的微孔濾膜濾過。
光阻法儀器裝置 光阻法不溶性微粒測定儀通常包括定量取樣器、傳感器和數據處理器三部分。測量粒度范圍為2～100μm，檢測微粒濃度為0～10000個/ml。不溶性微粒測定儀應定期校正與檢定（至少每6個月校正一次），并符合規定。
光阻法操作方法
檢查前的準備
取50ml微粒檢查用水（或其他溶劑）經微孔濾膜（一般孔徑為0.45μm）濾過，置于潔凈的適宜容器中，旋轉使可能存在的微粒均勻，靜置待氣泡消失。按光阻法項下的檢查法檢查，每10ml中含10μm以上的不溶性微粒應在10粒以下，含 25μm（≥25um）以上的不溶性微粒應在2粒以下。否則表明微粒檢查用水（或其他溶劑）、玻璃儀器和實驗環境不適于進行微粒檢查，應重新進行處理，檢測符合規定后方可進行供試品檢查。
供試品應事先除去外包裝，并用凈化水將容器外壁沖洗干凈，置適宜實驗環境中備用。
光阻法檢查法
標示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心翻轉20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，先倒出部分供試品溶液沖洗開啟口及取樣杯，再將供試品溶液倒入取樣杯中，靜置2分鐘或適當時間脫氣，置于取樣器上（或將供試品容器直接置于取樣器上）。開啟攪拌器，使溶液混勻（避免氣泡產生），依法測定至少3次，每次取樣應不少于5ml。記錄數據；另取至少2個供試品，同法測定。每個供試品第一次數據不計，取后續測定結果的平均值計算。
用水將容器外壁洗凈，小心翻轉20次，使溶液混合均勻，靜置2分鐘或適當時間脫氣，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉動，使溶液混勻（避免氣泡產生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數據；另取至少3個供試品，同法測定。第一個供試品的數據不計，取后續測定結果的平均值計算。
也可采用適宜的方法，在層流凈化臺上小心合并至少3個供試品的內容物（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2min或適當時間脫氣，置于取樣器上，開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產生），依法測定至少4次，每次取樣應不少于5ml。第一次數據不計，取后續測定結果的平均值計算，根據取樣體積與每個容器的標示裝量體積，計算每個容器所含的微粒數。
靜脈注射用無菌粉末 除另有規定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑）,小心蓋上瓶蓋，緩慢振搖使內容物溶解，靜置2分鐘或適當時間脫氣，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉動，使溶液混勻（避免氣泡產生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數據；另取至少3個供試品，同法測定。第一個供試品的數據不計，取后續測定結果的平均值計算。
也可采用適宜的方法，取至少3個供試品，在層流凈化臺上用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內容物溶解，小心合并至容器中的溶液（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2min或適當時間脫氣，置于取樣器上，開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產生），依法測定至少4次，每次取樣應不少于5ml。第一次數據不計，取后續測定結果的平均值計算，根據取樣體積與每個容器的標示裝量體積，計算每個容器所含的微粒數。
供注射用無菌原料藥 按品種項下規定，取供試品適量（相當于單個制劑的最大規格量），置取樣杯或適宜的容器中，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑）,緩慢振搖使內容物溶解，靜置2分鐘或適當時間脫氣，小心開啟容器，將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉動，使溶液混勻（避免氣泡產生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測定并記錄數據；另取至少3個供試品，同法測定。第一個供試品的數據不計，取后續測定結果的平均值，計算每個容器所含的微粒數。
記錄與計算 記錄應包括所用儀器型號、樣品包裝情況、檢驗數量以及注射用無菌粉末和供注射用無菌原料藥的溶解情況等，根據微粒測定儀數據處理器打印出相應的數據，計算出供試品每1ml（或每個容器或每份樣品）中所含10μm以上（≥10um及含25μm以上（≥25um）的不溶性微粒數。
注意事項
光阻法不適于黏度過高和易析出結晶的制劑，如乳劑、膠體溶液、混懸液、脂肪乳、甘露醇注射液等，也不適用于進入傳感器時容易產生氣泡的制劑（如碳酸鹽緩沖液制成的制劑）。對于一些溶解性差的樣品，樣品在管道中與水相混時，可能會在局部析出沉淀，這不僅會使即得結果偏高，也可能造成管路堵塞，出現該情況時應考慮采用顯微計數法。
供試品的檢查數量：為確保檢查結果具有統計學意義，除另有規定外，一般應取供試品3瓶（支）以上進行不溶性微粒檢查。在多支樣品的測定過程中，應盡量保持操作的一致性（如容器翻轉次數、取樣方式、除氣泡方式、攪拌速度等），以確保測定結果的可靠性。
對于小容量注射液，可以采用直接取樣法測定，也可以采用多支內容物合并法測定。直接取樣法可考察多支樣品檢查結果的重現性，體現各容器間的差異。當選用直接取樣法測定時，為避免供試品溶液與儀器管路中的水在相溶過程中可能產生的氣泡、乳光等導致測定數據偏高的現象，應先將前幾個容器的測定數據棄去，使供試品溶液充滿管路，然后讀取后續容器的測定數據作為供試品的測定結果。在小容量注射液直接取樣的檢測過程中，一定要避免吸入氣泡。一旦吸入氣泡，應使用微粒檢測用水或其他適宜溶劑對管路進行充分清洗，直至氣泡消失。當采用合并法取樣時，其關鍵步驟在于安錇是小容量注射劑的主要包裝形式，雖然通常都為易折安瓿，但在實際操作中很多安瓿并不“易折”，盡管用砂輪割據安瓿會大量增加微粒，但有時卻是開啟安瓿時的必要操作步驟。實際操作中如果在割據之后直接掰開，會大量引入微粒。經實驗比較，認為在保證開啟安瓿的情況下應盡量減少劃痕的長度和力度，掰開前增加用水清洗的操作過程。安瓿打開后，大量微粒集中于玻璃斷口處，經實驗比較，認為用干凈注射器抽取轉移的方法可以減少瓶口碎屑的干擾。此外，采用較粗的針頭抽取溶液，可減少氣泡的產生。
注射用無菌粉末一般先用微粒檢查用水或適宜溶劑溶解后，再采用直接取樣法或合并取樣法的測定。在某些品種（如頭孢替唑鈉、頭孢曲松鈉等）的檢測中發現，同一批樣品采用不同體積的溶劑溶解后，微粒測定結果差異較大，這可能與藥物性質等因素有關。經試驗研究，這些品種在某一個濃度范圍內，不溶性微粒數與主藥濃度呈線性關系，故這些品種一般在正文項下均規定了不溶性微粒測試溶液的濃度，應依法操作。
當光阻法測定結果不符合規定時，應采用顯微計數法不溶性微粒儀進行復驗，并以顯微計數法不溶性微粒儀為判斷依據。
結果與判定
標示裝量為100ml或100ml以上的靜脈注射液 除另有規定外，每1ml中含10μm以上（≥10um）的微粒不超過25粒，含25μm以上（≥25um）的微粒不超過3粒，判為符合規定。
標示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料 除另有規定外，每個供試品容器（份）中含10μm以上（≥10um）的微粒不得過6000粒，含25μm以上（≥25um）的微粒不得過600粒，判為符合規定。
以上就是梓夢編輯部對不溶性微粒檢查法之光阻法的操作規程的闡述，下期我們接著說關于顯微計數法不溶性微粒儀的檢測方法，我們下期見。
